农业基础科学论文_小菜蛾Toll-6基因的克隆及功
文章摘要:为探究Toll-6基因在小菜蛾先天免疫中的功能,对克隆鉴定的Toll-6基因序列进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测Toll-6基因的时空表达模式及微生物侵染响应模式,体外验证其在微生物结合、病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)结合、细菌凝集等方面的功能。结果表明:Toll-6基因全长2 313 bp,编码770个氨基酸,预测Toll-6蛋白具有富含亮氨酸重复序列的LRR胞外区、跨膜区和TIR胞内等典型Toll受体家族特征;Toll-6基因在不同发育阶段及不同组织中均有表达,其中成虫期表达量最高,4龄幼虫次之,在4龄幼虫中肠表达量最高;此外,苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis菌株Bt8010侵染小菜蛾4龄幼虫6 h后,Toll-6基因表达被显著抑制,而黏质沙雷氏菌Serratia marcescens菌株SmPXG6侵染小菜蛾4龄幼虫12 h时,Toll-6基因表达被显著上调,18 h后Toll-6基因表达被显著抑制;蛋白体外功能验证表明Toll-6蛋白不仅与细菌和真菌具有直接结合能力,还能与肽聚糖和脂多糖结合,但不具备细菌凝集功能。表明Toll-6蛋白可能作为模式识别受体直接识别并结合入侵病原微生物表面的PAMP,启动小菜蛾对入侵病原微生物的先天免疫防御,且对不同微生物可能具有不同的响应机制。
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