文章目录

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

    (1)对照：

    (2)低温胁迫处理：

    (3)干旱胁迫处理：

1.2 试验方法

    1.2.1 总RNA的提取及cDNA的合成

    1.2.2 大蒜As-1-SST基因的克隆

    1.2.3 序列分析

    1.2.4 实时荧光定量PCR

1.3 数据分析

2 结果与分析

2.1 大蒜果聚糖合成酶基因As-1-SST的克隆

2.2 大蒜As-1-SST蛋白的理化性质分析

2.3 大蒜As-1-SST的氨基酸亲水性和疏水性预测

2.4 大蒜As-1-SST的蛋白结构分析

2.5 大蒜As-1-SST的保守域分析与同源性序列比对

2.6 大蒜As-1-SST的进化树分析

2.7 大蒜As-1-SST基因在不同组织和逆境条件下的表达分析

3 讨论

4 结论

文章摘要:植物果聚糖是一类重要的可溶性碳水化合物,其在植物中的积累可提高植物的抗逆性。为了解大蒜蔗糖:蔗糖1-果糖基转移酶的序列特征和功能,本研究采用TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）得到乐都紫皮大蒜As-1-SST基因全长序列,利用BLAST、DNAMAN、ProtParam、SWISS-MODEL、MEGA等生物信息工具分析其序列特征,通过荧光定量PCR（qRT-PCR）分析As-1-SST基因在大蒜根、假茎、叶片和鳞芽中的表达差异及其对低温和干旱胁迫的响应情况。结果表明,大蒜As-1-SST基因全长1 872 bp,编码623个氨基酸,推测蛋白质分子质量为69.76 kDa,理论等电点为5.19,为不稳定亲水性蛋白;亚细胞定位预测结果显示,As-1-SST蛋白主要定位于液泡,该蛋白无信号肽,包含2个特异位点,属于糖苷水解酶32（GH32）家族。在进化关系上,大蒜As-1-SST与百合科的洋葱1-SST亲缘关系最为接近。qRT-PCR分析表明,As-1-SST基因在根中的表达量最高,其次是假茎,在鳞芽和叶片中表达水平较低,具有明显的组织特异性;不同组织As-1-SST对于低温及干旱胁迫的响应差异显著,低温胁迫显著诱导了根、假茎、叶片中As-1-SST的表达,而干旱胁迫只显著提高了鳞芽中As-1-SST的表达量,说明大蒜各组织As-1-SST对逆境信号的响应机制不同。本研究为进一步鉴定大蒜果聚糖合成酶基因的生物信息学功能和表达调控机制提供了一定的理论依据。

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